ISRE-Luc/NFκB-SEAP/THP-1
CBP74097
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| I. Background | |
| STING（干扰素基因刺激因子）又称 MPYS、TMEM173、MITA 和 ERIS，是一种跨膜蛋白，是环状二核苷酸（CDN）的直接传感器。CDN 是细菌信号转导中普遍存在的第二信使分子，是哺乳动物细胞的防御触发器。当细菌病原体攻击时，释放到细胞中的 CDN 直接与 STING 结合，激活的 STING 和 TANK 结合激酶-I (TBK1) 相互作用以诱导活性干扰素调节因子 (IRF3) 二聚体，然后该二聚体与细胞核中的干扰素刺激反应元件 (ISRE) 结合并导致 IFN-α/β 的产生。IFNβ 的产生是 STING 活化的标志。肿瘤微环境（TME）中由于天然免疫产生的信号传导是导致肿瘤特异性 T 细胞激活和肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）浸润的关键因素。其中尤其以 I 型 IFN 对肿瘤特异性 T 细胞的活化最为关键。因此，STING 激动剂可以顺利获得诱导Ⅰ型干扰素基因的表达，激活包括树突状细胞等免疫刺激细胞，改变肿瘤微环境并诱导肿瘤特异性 T 细胞的产生，从而顺利获得调节免疫系统达到抗肿瘤的目的。 | |
| II. Description | |
ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 报告基因细胞，针对 STING 激动剂和拮抗剂的药物发现，利用 STING 蛋白调控干扰素（interferon，IFN）及其下游基因表达的原理，在 THP-1细胞上构建了 2个诱导型的报告基因系统：一个是干扰素刺激反应元件（ISRE），下游接入 Luc 的分泌型荧光素酶，可以在底物的刺激下，催下产生化学发光信号，该报告基因可以评估 IFR通路，比如 type I IFNs and RLR (RIG-I-like receptor), CDS (cytosolic dsDNA sensor) or STING agonists；另外一个是 NFκB 通路，下游接入分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因，可以响应与 NFκB 通路相关的一些刺激。ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 报告基因药靶模型很好地模拟信号转导过程。 Figure 1. ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 细胞模型原理图
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| III. Introduction | |
| Host Cell: | THP-1 |
| Expressed gene: | ISRE-Luciferase；NFκB-SEAP |
| Stability: | 32 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.) |
| Freeze Medium: | 90% FBS+10% DMSO |
| Culture Medium: | RPMI-1640+ 10% HI-FBS+100 μg/ml Normocin+10 µg/ml Blasticidin+100 μg/ml Zeocin |
| Mycoplasma Testing: | Negative |
| Storage: | Liquid nitrogen |
| Application(s): | Functional(Report Gene) Assay |
| IV. Description of Host Cell Line | |
| Organism: | Homo sapiens, human |
| Tissue: | Peripheral blood |
| Disease: | Acute monocytic leukemia |
| Morphology: | Monocyte |
| Growth Properties: | Suspension |
| Ⅴ. Representative Data | |
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Figure 2. STING Stimulation Assay 验证结果
